紫外法对DNA熔解温度(Tm)的测定 紫外可见分光光度计UV7配备恒温器

　　【仪器仪表网  专题推荐】人世间生灵都对温度十分敏感。温度变化影响着天地万物生息，造成了苍穹大地间的千姿百态。古往今来，对于温度的调节和热量的运用，也在人类生活生产中扮演了非常重要的角色。在生命科学研究领域，紫外法对DNA熔解温度(Tm)的测定，可以借助梅特勒紫外可见分光光度计UV7配备酷T(CuveT)恒温器。

　　天然状态的DNA，在比较高的温度下会发生熔解(又称变性)：双链DNA(dsDNA)解链为单链DNA(ssDNA)，且变为无规则线团。DNA熔解温度(melting temperature, Tm)是使DNA双螺旋结构解开一半时所需要的温度。DNA的变性从开始解链到完全解链，是在一个相当小的温度范围内完成的。并且，在光学性质上会产生“增色效应”，即紫外吸收值升高。所以，我们可以利用紫外可见分光光度计检测DNA样品在260nm处吸光度随温度的变化，对解链过程进行监测。

　　不同种类DNA的Tm值不同：这是由于鸟嘌呤-胞嘧啶(G≡C)核苷酸之间有3个氢键，而腺嘌呤-胸腺嘧啶(A=T)之间有2个氢键，G≡C核苷酸解离所需能量大于A=T碱基对所需能量。所以，dsDNA中鸟嘌呤-胞嘧啶碱基对(G≡C)含量越高，其熔解温度(Tm)就越高。由此可见，熔解温度(Tm)可指示不同DNA样品的碱基组成，即G≡C与A=T的比例。

　　在以下示例实验中，使用仪器仪表网设备-梅特勒-托利多紫外可见分光光度计UV7配备酷T(CuveT)恒温器，测定20℃-95℃升温范围内鲑鱼精DNA在260nm处的吸光度变化，以监测其变性过程。我们用各温度点测得的吸光度绘制图谱，可得到一条温度-吸光度S形曲线，如下图所示：

　　在此实验案例中，鲑鱼精DNA的Tm值通过确定S形曲线的拐点来确定。经测定和计算，鲑鱼精DNA的Tm值为64.4℃，说明其G≡C碱基对的浓度相对较低。确定熔解温度的另外一种方法是用切线法对S形曲线的拐点进行图形化评估。

　　综上所述，梅特勒-托利多超越系列紫外可见分光光度计可搭载酷T帕尔贴控温系统或劳达(LAUDA)等水浴恒温系统，实现了对样品精确快捷的温度控制。