畜肉食品中4,4’-二硝基均二苯脲(DNC)检测的前处理方案-仪器仪表网

　　【仪器网专题推荐】为规范化尼卡巴嗪在养殖鸡群中的药物治疗，今年我国开始生效实施的GB31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药zui大残留限量》中明文规定了DNC在肉食鸡不同组织中的zui大残留限量。

　　此文论述了怎样把4,4’-二硝基均二苯脲(DNC)从样品基质中分离提取出来，并经由净化后，转化成液质联用仪可以检验的形式。以提取、净化为重点，根据国家标准GB29690-2013，为检验人员和相关领域科学研究人员给予一定的借鉴。

　　检测项目：4,4’-二硝基均二苯脲(DNC)

　　应用范围：鸡肌肉/鸡蛋

　　液相色谱-质谱/质谱法

　　方法原理：试料中残留的4,4’-二硝基均二苯脲，用乙腈提取，正己烷除脂，75 %甲醇水溶液萃取，液相色谱-质谱/质谱法测定，内标法定量。

　　前处理仪器：

　　分析天平(感量0.00001 g和0.01 g);涡旋振荡器;离心机;氮吹仪;离心管(50 mL);滤膜(0.2 μm)。

　　检测仪器：LC-MS/MS+ESI源

　　试样制备与保存

　　1.鸡蛋

　　取适量新鲜或冷藏的kong白或供试鸡蛋，去壳，并使均质。零下20 ℃以下保存。

　　取均质后的供试样品，作为供试试料;

　　取均质后的kong白样品，作为kong白试料;

　　取均质后的kong白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为kong白添加试料。

　　2.鸡肌肉

　　取适量新鲜或冷冻的kong白或供试组织，绞碎，并使均质。零下20 ℃以下保存。

　　取均质后的供试样品，作为供试试料;

　　取均质后的kong白样品，作为kong白试料;

　　取均质后的kong白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为kong白添加试料。

　　前处理方法

　　提取与净化

　　称取试料2 g±0.02 g，于50 mL离心管中，添加10 μg/mL 4,4’-二硝基均二苯脲-D8标准工作液适量，加无水硫酸钠2 g，乙腈8 mL，涡旋0.5 min，超声5 min，5000 r/min离心10 min，取上清液，于40 ℃氮气吹干，加75 %甲醇水溶液饱和的正己烷1 mL，涡旋10 s，再加75 %甲醇水溶液1.0 mL，充分涡旋混合，于40 ℃水浴中静置5 min，2000 r/min离心5 min，取下层清液，滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

　　国标解读及注意事项

　　1.DNC标准物质用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3个月;DNC-D8标准物质用二甲基甲酰胺配成1 mg/mL的标准储备液，在2 ℃-8 ℃保存，可使用3个月。

　　2.前处理过程中使用乙腈提取目标化合物，无水硫酸钠除水，正己烷除脂。

　　3.前处理过程中注意控制水浴温度不超过40 ℃，防止目标化合物降解。

　　4.上清液浓缩后，加入正己烷和定容液，需要充分涡旋混合进行液液分配萃取，保证除脂效果;水浴静置过程中观察分层情况，可以适当延长静置时间，保证水相与有机相分离完全。

　　5.同位素内标加入量决定zui终定容后的理论上机浓度，务必与配制的标准曲线中各点同位素的浓度相一致，才能正确校正回收率。

　　6.液质联用仪负离子扫描检测，为保证检测灵敏度，建议正负离子扫描分开仪器进行。