3.15曝出“瘦肉精”问题液相色谱仪出具克伦特罗的测定方案-仪器仪表网

　　【仪器网 专题推荐】3.15晚会如期而至，此次晚会以“提振消费从心开始”为主题内容。其中有关食品卫生安全“瘦肉精——‘硬羊’背后的秘密”的问题被特别指出。肉类中的瘦肉精该怎么使用高效液相色谱仪检验出来呢?海能技术悟空团队马不停蹄，为您筹备了一份详细的检验实施方案。

　　中国尽管于2000年提出明令禁止应用“瘦肉精”类药物，但在养殖业生产中“瘦肉精”的应用仍层出不穷。尽管许多国家都禁止在食源性动物的生产中应用盐酸克伦特罗(瘦肉精)。但新闻记者在现场悄悄带回的白色粉末以及精饲料，在经过瘦肉精快速检测条检验后，结论均为呈阳性。

　　实验部分

　　动物性食品中克伦特罗的测定-高效液相色谱法

　　测试仪器仪表与试剂

　　1、仪器

　　高效液相色谱仪、水浴超声清洗器、磨口玻璃离心管、酸度计、离心机、振荡器、旋转蒸发器、涡旋式混合器、针筒式微孔过滤膜(0.45μm)、匀浆器、N2 -蒸发器。

　　 K2025高效液相色谱仪

　　2、试剂

　　克伦特罗，纯度≥99.5%、磷酸二氢钠、氢氧化钠、氯化钠、高氯酸、浓氨水、异丙醇、乙酸乙酯、甲醇：HPLC级、乙醇、高氯酸溶液(0.1mol/L)、氢氧化钠溶液(1mol/L)、磷酸二氢钠缓冲液(0.1mol/L，pH=6.0)、异丙醇+乙酸乙酯(40+60)、乙醇+浓氨水(98+2)、甲醇+水(45+55)。

　　克伦特罗标准溶液的配制：准确称取克伦特罗标准品用甲醇配成浓度为250mg/L的标准储备液，贮于冰箱中;使用时用甲醇稀释成0.5mg/L的克伦特罗标准使用液，进一步用甲醇+水(45+55)适当稀释。

　　弱阳离子交换柱(LC-WCX)(3mL)。

　　实验方法

　　1、提取

　　a.肌肉、肝脏、肾脏试样

　　称取肌肉、肝脏或肾脏试样10g(精确到0.01g),用20mL 0.1mol/L高氯酸溶液匀浆，置于磨口玻璃离心管中;然后置于超声波清洗器中超声20min，取出置于80℃水浴中加热30min。取出冷却后离心(4500r/min)15min。倾出上清液，沉淀用5mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗涤，再离心，将两次的上清液合并。用1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至9.5±0.1，若有沉淀产生，再离心(4500r/min)10min，将上清液转移至磨口玻璃离心管中，加入8g氯化钠，混匀，加入25mL异丙醇+乙酸乙酯(40+60)，置于振荡器上振荡提取20min。提取完毕，放置5min(若有乳化层稍离心一下)。用吸管小心将上层有机相移至旋转蒸发瓶中，用20mL异丙醇+乙酸乙酯(40+60)再重复萃取一次，合并有机相，于60℃在旋转蒸发器上浓缩至近干。用1mL 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH6.0)充分溶解残留物，经针筒式微孔过滤膜过滤，洗涤三次后完全转移至5mL玻璃离心管中，并用0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH6.0)定容至刻度。

　　b.尿液试样

　　用移液管量取尿液5mL，加入20mL 0.1mol/L高氯酸溶液，超声20min混匀，置于80℃水浴中加热30min。以下按步骤a从“用1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至9.5±0.1”起开始操作。

克伦特罗的测定方案

　　c.血液试样

　　将血液于4500r/min离心，用移液管量取上层血清1mL置于5mL玻璃离心管中，加入2mL 0.1mol/L高氯酸溶液，混匀，置于超声清洗器中超声20min，取出置于80℃水浴中加热30min。取出冷却后离心(4500r/min)15min。倾出上清液，沉淀用1mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗涤，离心(4500r/min)10min，合并上清液，再重复一遍洗涤步骤，合并上清液。向上清液中加入约1g氯化钠，加入2mL异丙醇+乙酸乙酯(40+60)，在涡旋式混合器上振荡萃取5min，放置5min(若有乳化层稍离心一下)，小心移出有机相于5mL玻璃离心管中，按以上萃取步骤重复萃取两次，合并有机相。将有机相在N2-浓缩器上吹干。用1mL 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH6.0)充分溶解残留物，经筒式微孔过滤膜过滤完全转移至5mL玻璃离心管中，并用0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH6.0)定容至刻度。

　　2、净化

　　依次用10mL乙醇、3mL水、3mL 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(pH6.0)、3mL水冲洗弱阳离子交换柱，取适量前述a、b、c试样中的提取液至弱阳离子交换柱上，弃去流出液，分别用4mL水和4mL乙醇冲洗柱子，弃去流出液，用6mL乙醇+浓氨水(98+2)冲洗柱子，收集流出液。将流出液在N2-蒸发器上浓缩至干。

　　3、试样测定前的准备

　　于净化、吹干的试样残渣中加入100μL~500μL流动相，在涡旋式混合器上充分振摇，使残渣溶解，液体浑浊时用0.45μm的针筒式微孔过滤膜过滤，上清液待进行液相色谱测定。

　　4、色谱参考条件

　　实验室仪器设备: 高效液相色谱仪：K2025P2二元高压输液泵、K2025AS自动进样器、K2025CO柱温箱、K2025UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站;

　　色谱柱：BDS或ODS柱，250mmx4.6mm，5μm;

　　流动相：甲醇+水(45+55);

　　流速：1mL/min;

　　进样量：20μL~50μL;

　　检测波长：244nm;

　　柱温：25℃。

　　5、测试

　　吸取20μL~50μL标准校正溶液及试样液注入液相色谱仪，以保留时间定性，用外标法单点或多点校准法定量。