【仪器设备网 行业应用】本方案中,我们使用华法林和呋塞米作为代表性分子,在⼀家典型的发现生物分析实验室开展了研究。我们研究Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪这款新产品如何高灵敏度定量人和大鼠血浆中的华法林和呋塞米。
使用ACQUITY Premier UPLC系统和Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪定量从人和大鼠血浆中提取的华法林和呋塞米。能够实现:人和大鼠血浆中华法林和呋塞米的LLOQ分别为25 pg/mL和100 pg/mL;校准曲线和各QC浓度上所有点的%CV均<12%,完全位于生物分析验收标准的允许范围内。ACQUITY Premier UPLC系统和Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪可提供优异的稳定性和灵敏度,且方法性能不受影响,因此是适用于发现生物分析实验室的理想平台。
实验部分
1样品前处理
用100 ng/mL的华法林和呋塞米储备液加标大鼠和人血浆,建立0.025 - 100 ng/mL的校准曲线。使用单独储备液(100 ng/mL)生成LLOQ、LQC、MQC和HQC的QC样品。使用乙腈按1:3的比例进行蛋白沉淀,所有样品均提取100 μL,⼀式三份。将样品离心,上清液转移到LC-MS样品瓶以供分析。
2液相色谱条件
液相色谱系统:ACQUITY Premier UPLC系统
色谱柱:MaxPeak UPLC HSS T3 2.1 x 50 mm色谱柱
柱温:60°C
样品温度:5°C
进样体积:1 μL
流速:600 μL/min
流动相A:含0.01%甲酸的100%水溶液
流动相B:含0.01%甲酸的100%乙腈溶液
梯度:在1.5 min内从5%增⾄95%
3质谱条件
质谱系统:Xevo TQ Absolute
电离模式:ESI-
毛细管电压:0.5 kV
MRM通道:
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